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7 Problemas mais comuns do HPLC: Possíveis causas e soluções

Quando surge um problema com o sistema de HPLC, nem sempre é necessário recorrer de imediato à assistência técnica externa. De facto, em algumas situações, aquilo que aparenta ser uma avaria grave no HPLC pode afinal ter uma resolução simples, bastando realizar algumas operações simples para corrigir a origem do problema.

Mesmo quando são cumpridas as boas práticas na utilização do HPLC, podem surgir anomalias. A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência envolve um sistema complexo que, por vezes, pode originar problemas. Nessas situações, é importante efetuar uma verificação das possíveis causas para tentar ultrapassar a avaria. Sempre que não for possível corrigir o problema no HPLC deverá, então sim, chamar a assistência técnica. 

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7 Problemas mais frequentes do HPLC e como os corrigir

Identificámos abaixo as 7 falhas mais recorrentes em sistemas de HPLC, as suas respetivas causas e algumas operações simples que as podem solucionar. 

Assim, vai conseguir, em muitos casos, solucionar eventuais anomalias no seu sistema de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência de forma rápida. 

 

  • 1. Excesso de pressão ou pressão elevada 

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Obstrução dos tubos da fluídica

Lavar o sistema usando os solventes apropriados

Precipitação de sais da fase móvel ou da amostra

Não interromper o fluxo até que a análise de todas as amostras esteja concluída e no final do trabalho lavar o sistema exaustivamente com água

Obstrução do filtro de linha

Lavar ou substituir o filtro de linha

Colmatação do frit ou da coluna Lavar a coluna segundo as instruções do fabricante

 

  • 2. Erros de reprodutibilidade

Causas possíveis O que fazer para tentar resolver
O solvente não foi devidamente desgaseificado Certificar-se que o desgaseificador está a funcionar, e no modo ON
Presença de ar na seringa de injeção

Purgar o sistema até remover todas as bolhas de ar

Septo do vial danificado ou incompatível

Substituir as tampas dos vials

Problema com algum dos componentes do injetor

Verificar os componentes do injetor e dependendo do modelo, efetuar testes de despiste ou funções automáticas disponíveis no próprio HPLC

Célula do detetor suja

Lavar a célula do detetor

 

  • 3. Ruído na linha de base

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Coluna mal equilibrada

Aumentar o tempo de estabilização da coluna

Flutuações de temperatura

Verificar se o forno de coluna está devidamente operacional

Fuga na coluna ou no detetor

Ajustar os parafusos de entrada e de saída

Célula do detetor suja

Lavar a célula do detetor

Fases móveis contaminadas Voltar a preparar fases móveis frescas

 

  • 4. Ausência de picos ou diminuição da sua intensidade

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Amostra degradada, contaminada ou indevidamente preparada

Voltar a preparar as amostras

Fase móvel incorreta

Verificar a composição das fases móveis

Coluna contaminada

Lavar a coluna

Perda de eficácia da coluna

Substituir a coluna

Fuga na coluna

Ajustar os parafusos de entrada e de saída

Lâmpada com baixa energia Substituir a lâmpada

 

  • 5. Picos desdobrados

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Solvente de dissolução da amostra inapropriado

Verificar a solubilidade do solvente na amostra

Excesso de carga na coluna

Diluir a amostra a injetar ou injetar menor volume de amostra

Amostra degradada

Preparar amostras frescas

Gradiente inapropriado

Modificar o gradiente para outras percentagens

Coluna danificada

Substituir a coluna

 

  • 6. Desvios nos tempos de retenção

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Bolhas nas fases móveis.

Voltar a desgaseificar as fases móveis e por mais tempo.

Falha nas “checkvalves”.

Substituir ou lavar as “checkvalves”.

Fuga de solvente

Verificar a estanquicidade do sistema.

Filtros de solvente entupidos.

Substituir ou lavar os filtros de solvente.

Filtro de linha entupido.

Substituir ou lavar o filtro de linha.

Falta de reprodutibilidade na temperatura. Verificar a operacionalidade do forno de colunas e do refrigerador de amostras.

 

  • 7. Aumentos nos tempos de retenção

Causas possíveis

O que fazer para tentar resolver

Coluna mal equilibrada

Aumentar o tempo de estabilização da coluna

Flutuações de temperatura

Verificar se o forno de coluna está operacional

Fuga na coluna ou no detetor

Verificar a estanquicidade do sistema

Fases móveis contaminadas Voltar a preparar fases móveis frescas

 

 

O que fazer em caso de Avaria no Sistema HPLC? 

Principalmente após períodos de downtime, podem ocorrer anomalias no funcionamento do sistema HPLC do seu laboratório. Um cuidado que ajuda a prevenir estas situações passa pela manutenção preventiva dos seus equipamentos

Se detetar alguma falha com o HPLC, pode começar por efetuar algumas verificações para identificar a origem da anomalia. Face às causas possíveis há correções que pode fazer para resolver o problema. 

No entanto, se não for possível solucionar ou identificar o que poderá estar a provocar a avaria, o melhor será entrar em contacto com a assistência técnica.  

 

Contactar a Assistência Técnica Maldral

 

2021-08-16

Damien Costa

Damien Costa

Diretor Comercial do Grupo Maldral

  • Responsável pelo departamento comercial da Maldral
  • Licenciado em Química, com especialização em Eletroquímica aplicada à Odontologia na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra
  • Mestre em Química Avançada e Industrial com especialização em Fotoquímica
  • Pós-graduado em Informática de Gestão no Instituto Superior de Gestão da Universidade Lusófona

Experiência

Com nativa inclinação para as Ciências do explicável e do inexplicável, iniciei o meu percurso de investigador em 2010 na Universidade Coimbra onde estudei e em parceria com a Universidade de Alcalá de Henares e participei em múltiplos estudos nas mais diferentes áreas da Química, sempre de mãos dadas com outros ramos da ciência tais como a Física, Microbiologia, Genética Molecular e das Nanotecnologias numa versão mais futurista do meu ser.

O privilégio de ter frequentado grandes instituições de ensino como a faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra, o Instituto Superior Técnico e a Faculdade de Ciências e Tecnologias da Universidade Nova de Lisboa catapultaram o meu percurso académico para diversas publicações científicas, convite para inúmeras palestras e ainda para escrita de alguns capítulos de livros.

A prática laboratorial é de facto um dos meus fortes, no entanto, todo o conhecimento científico deve ser transmitido e partilhado, por isso, exerci consultadoria técnica para inúmeras empresas farmacêuticas nacionais e internacionais, participando inclusive em candidaturas a iniciativas de Financiamento para a Investigação e Desenvolvimento (I&D).

Na verdade, havia ainda algumas áreas da Química que me despertavam muito interesse e que permaneciam inexploradas. Foi então que tive o enorme privilégio de ser convidado para trabalhar na Maldral, iniciando o meu percurso de especialista na área da cromatografia líquida e da espectrometria de massa. A Maldral é a combinação perfeita para pôr em prática todos os conhecimentos anteriormente adquiridos.

Quando cheguei à Maldral em 2016, comecei como técnico de HPLC e de LC-MS onde fazia assistências técnicas, manutenções preventivas e qualificações de equipamentos em toda linha da cromatografia líquida e detetores acoplados (espectrofotometria UV-Vis e Fluorescência, eletroquímicos, índice de refração e espectrometria de massa) para diversas marcas de renome internacional como a Waters®, a Hitachi® e a Agilent®. Especializei-me paralelamente em espectrometria de massa através do desenvolvimento de técnicas analíticas LC-MS/MS que deram início ao negócio de kits clínicos da Maldral.

Hoje sou responsável pelo departamento comercial da Maldral e desde 2018 que venho aperfeiçoando este meu lado mais social e criativo na empresa, que tanto gosto.


Formação

Tirei a licenciatura em Química na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra onde escolhi o ramo Científico em Química-Física com especialização em Eletroquímica aplicada à Odontologia.

De seguida, apostei num mestrado em Química Avançada e Industrial na mesma Faculdade e especializei-me em Fotoquímica.

Por fim, para explorar o meu lado mais ligado às Tecnologias da Informação decidi fazer uma Pós-Graduação em Informática de Gestão no Instituto Superior de Gestão da Universidade Lusófona.

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